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口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 RT-PCR 法) |
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口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 RT-PCR 法) 【產(chǎn)品名稱】 商品名稱：口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 RT-PCR 法) 【包裝規(guī)格】 50T/盒 【貨 號(hào)】 XC-2010 【預(yù)期用途】 本試劑盒適用于檢測(cè)的扁桃體、淋巴結(jié)等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標(biāo)本中口蹄疫病毒 RNA， 適用于口蹄疫病毒感染 的輔助診斷。 【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR 技術(shù)，通過設(shè)計(jì) 1 對(duì)口蹄疫病毒特異性引物，結(jié)合 1 條特異性探針，用熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)口蹄疫病毒核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)， 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。 【試劑組成】 名 稱 規(guī) 格 酶液 50μL×1 管 FMDV-U 反應(yīng)液 950uL×1 管 FMDV-U 陽性質(zhì)控品 50μL ×1 管 陰性質(zhì)控品 50μL ×1 管 備注：不同批號(hào)的試劑盒組分不宜交叉使用。 【儲(chǔ)存條件及有效期】 -20℃±5℃， 避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融≤5 次， 有效期 12 個(gè)月。 【適用儀器】 ABI 系列 、安捷倫 MX3000P/3005P、Bio-Rad 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。 【標(biāo)本采集】 病死或撲殺豬，取分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等 【保存和運(yùn)輸】 上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃， 長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月， 標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸， 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。 【使用方法】 1. 樣品處理(樣本處理區(qū)) 1.1 樣本前處理 組織樣品： 每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱取樣品約 1g， 手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g于研磨器中研磨， 加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù) 研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min， 取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中； 全血樣本：待血凝固后， 取血清 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。 1.2 RNA 提取 推薦采用深圳市迅測(cè)生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取法/磁珠法)，請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。 2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū)) 根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)， 設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表： 試劑 FMDV-U 反應(yīng)液 酶液 用量(樣本數(shù)為 N) 19μL 1μL 3. 加樣(樣本處理區(qū)) 將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL， 分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。 4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū)) 4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)； 4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL； 熒光通道選擇： 檢測(cè)通道選擇 CY5 檢測(cè)， 淬滅通道選擇 NONE， 參比熒光選 NONE。 4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置： 步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào) 1 1 cycle 50℃ 15min 否 2 1 cycle 95℃ 3min 否 3 45cycles 95℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是 5. 結(jié)果分析判定 5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定 設(shè)置 Baseline 和 Threshold： 一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)， 重新分析結(jié)果。 5.2 結(jié)果判斷 陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤38.0， 且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。 可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>38.0， 且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤38.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性， 否則為陰性。 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。 6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示； 陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期， 且 Ct 值≤30； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足， 否則實(shí)驗(yàn)視為無效。 7. 檢測(cè)方法的局限性 ? 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)； ? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果； ? 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏， 會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果； ? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果； ? 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果； ? 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果； ? 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考， 如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。 【注意事項(xiàng)】 ? 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行； ? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化， 完全混勻并短暫離心； ? 反應(yīng)液應(yīng)避光保存； ? 反應(yīng)中管蓋需蓋緊； ? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服； ? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行， 以免交叉污染； ? 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器； ? 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。 從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
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