| 更新時間： | 2018-02-01 |
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| 廠商性質(zhì)： | 生產(chǎn)廠家 |
黃曲霉素（Aflatoxin）ELISA試劑盒--價格合適，質(zhì)量可靠。咨詢！ 【質(zhì)量承諾】: 非人為造成的產(chǎn)品質(zhì)量問題，視具體情況，我司負責退貨換貨。
黃曲霉素(AFT)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
聲明：應國家相關部門關于違禁字的規(guī)定本文中黃曲霉堵素中的毒以堵替代
1 使用目的：
本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中總黃曲霉堵素(AFT)殘留的定量檢測。
2 實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法，在微孔板包被有黃曲霉素偶聯(lián)抗原，加入黃曲霉堵素(AFT)標準品或樣品，游離黃曲霉堵素(AFT)與微孔條上預包被的黃曲霉堵素(AFT)偶聯(lián)抗原互相競爭抗黃曲霉堵素(AFT)抗體酶標記物，用 TMB 底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色，用酶標儀在 450nm 波長下進行檢測，吸光值與樣品中黃曲霉堵素(AFT)含量成反比，通過標準曲線計算樣品中黃曲霉堵素(AFT)的含量。
3 試劑盒組成
- 預包被的 AFT 偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1 塊（12 孔×4 條）。
- AFT 標準品：6 瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7ng/ml,8.1 ng/ml。
抗 AFT 抗體酶結合物：1 瓶（3ml）。
顯色液 A：1 瓶（3ml）。
顯色液 B：1 瓶（3ml）。
終止液：1 瓶（3ml），2M 硫酸。
樣本稀釋液：1 瓶（10×, 3ml），用于樣品稀釋用。
濃縮洗滌液：1 瓶（20×，20ml），用于洗板。
說明書一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 設備
4.1.1波長450nm酶標儀。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當?shù)臑V紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5 貯存
試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
未用完的微孔板應該密封干燥保存
6 注意事項
使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
不要使用過期試劑盒。
試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
標準品中含有黃曲霉素，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結果。
稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果
混合試劑時應避免起泡。
7 工作液準備
- AFT標準品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
- 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
- 樣本稀釋液：備用
- 顯色劑：已備用，避免光線直照
- 反應終止液：已備用
8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現(xiàn)結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品，加入25µl樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
- 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時?；販刂潦覝兀?/span>25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準確度。
- 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
- 請不要改變分析程序
- 請使用精確的微量移液器
- 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
- ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
- 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
- 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2 分析步驟
- 預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測
- 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
- 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
- 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標準品溶液
- 在各標準孔中加入50µl的標準品溶液
- 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
- 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結合物
- 輕輕晃動反應板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液
體。
9.4 反應
- 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動反應板使之*混勻
- 37℃溫浴10min
- 每孔中加入50µl終止液，混勻
- 在450nm下檢測吸光度，結果在5min內(nèi)讀取。
- 結果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標準溶液的平均吸光度值
10.1.2以黃曲霉素B1濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為AFT濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中AFT濃度C（ng/ml）
10.1.3由于樣品經(jīng)過了預先稀釋，因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
- 特異性
物質(zhì) 交叉反應黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%
12 試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.1ppb B0吸光度*值應大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。
13試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ng/ml~8.1ng/ml。
14 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
